Введение в мир цоликлонов

Определение группы крови системы АВО является критически важной процедурой в современной медицине. От ее точности зависит успех переливания крови и предотвращение серьезных осложнений. Традиционно для этой цели использовались изогемагглютинирующие сыворотки, однако в последние годы их вытесняют более совершенные и безопасные реагенты – цоликлоны.

Цоликлоны представляют собой высокоспецифичные антитела, полученные из гибридомных клеточных линий. Эти линии образуются в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Каждая индивидуальная гибридомная линия продуцирует гомогенные антитела одного класса иммуноглобулинов, идентичные по структуре и биологической активности.

Преимущества цоликлонов над изогемагглютинирующими сыворотками

В отличие от традиционных сывороток, цоликлоны обладают рядом неоспоримых преимуществ:

• Высокая специфичность: Цоликлоны содержат антитела только против антигенов А или В, исключая возможность неспецифической агглютинации.
• Повышенная авидность: Реакция агглютинации с цоликлонами наступает быстрее и выражена сильнее, особенно при слабых антигенах.
• Безопасность: Цоликлоны не содержат клеток человеческих тканей, полностью исключая риск инфекционного заражения.
• Стандартизация: Производство цоликлонов строго контролируется, обеспечивая высокуювоспроизводимость результатов.

Процесс получения цоликлонов

Получение цоликлонов – сложный многоступенчатый процесс, основанный на технологии гибридомных клеток. Вот его основные этапы:

• Иммунизация мышей: Мышей иммунизируют антигенами А или В человеческих эритроцитов.
• Выделение В-лимфоцитов: Из селезенки иммунизированных мышей выделяют антителопродуцирующие В-лимфоциты.
• Слияние с миеломными клетками: В-лимфоциты сливают с клетками мышиной миеломы, образуя гибридомы.
• Отбор гибридом: Гибридомы, продуцирующие нужные антитела, отбирают и клонируют.
• Наработка антител: Отобранные клоны гибридом культивируют для массового получения цоликлонов.

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для быстрого и точного определения групп крови системы АВО. Их можно использовать с нативной кровью, стабилизированной консервантами, а также со свежей кровью, взятойиз пальца или из вены без консерванта. Высокая концентрация эритроцитов обеспечивает наиболее четкую реакцию агглютинации.

Пошаговая методика определения групп крови с цоликлонами

Процедура определения группы крови с помощью цоликлонов проста и не требует сложного оборудования:

• Подготовьте планшет или тарелку со смачиваемой поверхностью.
• Нанесите по две капли (0,1 мл) цоликлонов анти-А и анти-В под соответствующими надписями.
• Рядом с каплями реагентов нанесите по одной маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови.
• Смешайте антитела и кровь стеклянной палочкой или предметным стеклом(во избежание контаминации - для каждой лунки своя палочка!).
• Наблюдайте за реакцией при легком покачивании в течение 2,5 минут.
• Положительный результат – агглютинация эритроцитов, отрицательный – агглютинации нет, равномерное окрашивание капли.

Результаты определения группы крови с цоликлонами интерпретируются следующим образом:

• Группа 0 (I): Отсутствие агглютинации с обоими цоликлонами.
• Группа А (II): Агглютинация с цоликлоном анти-А, отсутствие агглютинации с цоликлоном анти-В.
• Группа В (III): Агглютинация с цоликлоном анти-В, отсутствие агглютинации с цоликлоном анти-А.
• Группа АВ (IV): Агглютинация с обоими цоликлонами.

Для получения точных результатов при работе с цоликлонами необходимо соблюдать следующие правила:

• Использовать отдельные маркированные пипетки для каждого цоликлона.
• Не допускать высыхания или помутнения реагентов.
• Проводить исследование при температуре от +15°С до +25°С и хорошем освещении.
• Тщательно промывать и вытирать насухо планшеты перед каждым использованием.

Ложная агглютинация и ее причины

В редких случаях при определении группы крови с цоликлонами может наблюдаться ложная агглютинация. Причинами этого явления могут быть:

• Наличие аномальных антигенов на эритроцитах.
• Аутоантитела в исследуемой крови.
• Загрязнение реагентов или планшета.
• Нарушение методики исследования.

При подозрении на ложную агглютинацию необходимо повторить исследование с соблюдением всех правил или использовать альтернативные методы определения группы крови. Несмотря на широкое распространение цоликлонов, исследования в этой области продолжаются. Ученые работают над созданием более чувствительных и специфичных реагентов, способных определять редкие и слабые варианты антигенов и выявлять аномалии. Кроме того, ведется разработка автоматизированных систем для ускорения и стандартизации процесса определения групп крови.

Цоликлоны являются революционным достижением в области трансфузиологии, обеспечивающим высокую точность и безопасность определения групп крови. Их применение позволяет свести к минимуму риски, связанные с переливанием несовместимой крови, и тем самым спасать жизни пациентов. По мере дальнейшего совершенствования этих реагентов, их роль в клинической практике будет только возрастать.